为什么用限度酶切割目标基因时刻须要经常使用两种以上不同的限度酶启动切割 (为什么用限度来衡量)

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• 为什么用限度酶切割目标基因时刻须要经常使用两种以上不同的限度酶启动切割？
• 动物--选修模块3：现代动物科技专题]如图一为含有目标基因的外源DNA，图二为某普通质粒，表中是几种限度
• 构建基因表白载体的环节中，切割质粒和 目标基因时 能否须要同一种限度酶？

为什么用限度酶切割目标基因时刻须要经常使用两种以上不同的限度酶启动切割？

为了防止目标基因和运载体自身环化。

为保障目标基因正序拔出运载体，防止反向衔接。

限度性核酸内切酶是可以识别并附着特定的脱氧核苷酸序列，并对每条链中特定部位的两个脱氧核糖核苷酸之间的磷酸二酯键启动切割的一类酶。

裁减资料：

限度造用实践就是限度酶降解外源DNA ，保养宿主遗传稳固的包全机制。

甲基化是经常出现的润色作用，可使腺嘌呤A和胞嘧啶C甲基化而遭到包全。

经过甲基化作用到达识别自身遗传物质和外来遗传物质的目标。

与第一型限度酶相似，同时具备润色及识别切割的作用。

可识别短的不对称序列，切割位与识别序列约距24-26个碱基对。

为有效的切割DNA，必定同时思考DNA甲基化和限度酶对该类型甲基化的敏理性。

另外，大局部商业限度酶如今专门用于切割甲基化DNA。

动物--选修模块3：现代动物科技专题]如图一为含有目标基因的外源DNA，图二为某普通质粒，表中是几种限度

（1）外源DNA是双链的DNA，含有2个游离的磷酸基团；质粒是双链环状DNA分子，没有游离的磷酸基团．（2）依据表格剖析，Sma I限度酶能识别CCGGG，并在C（胞嘧啶脱氧核苷酸）和G（ 鸟嘌呤脱氧核苷酸）之间切割磷酸二酯键．（3）外源DNA和质粒上都有EcoRⅠ酶切割位点，添加DNA衔接酶取得的环状DNA或者有3种状况，即目标基因-目标基因、质粒-质粒、目标基因-质粒．（4）用EcoRI酶切割外源DNA和质粒两者构成相反的黏性末端，则外源DNA和质粒的黏性末端会自身环化，甚至是反向接入；因此经常使用BamH I和HindⅢ两种限度酶同时解决外源DNA和质粒，能防止切割的外源DNA、质粒的黏性末端自身环化．（5）基因表白载体含有目标基因、启动子、中断子和标志基因；目标是使目标基因在受体细胞中稳固存在，并可以遗传给下一代，同时使目标基因能够表白和施展作用．（6）质粒中含有抗生素抗性基因，重组质粒导入大肠杆菌造就时，造就基中添加抗生素启动甄别和挑选含有重组质粒的细胞．故答案为：（1）2 0（2）胞嘧啶脱氧核苷酸 鸟嘌呤脱氧核苷酸（3）DNA衔接酶 3（4）防止切割的外源DNA、质粒的黏性末端自身环化、（5）目标基因 启动子 中断子（6）抗生素 重组质粒

构建基因表白载体的环节中，切割质粒和 目标基因时 能否须要同一种限度酶？

关于这个疑问，采取以下回答：1.教材中确实驳回单酶切的方法（由于咱们的基因工程处于飞速开展的阶段，以前多驳回此方法），假设应答考试，标题没有特意说明即以为用同一种限度性核酸内切酶；2.然而单酶切容易产生反向衔接和自身环化的疑问（可以自己在草稿纸上举例试一试），所以如今的技术多驳回双酶切，即目标基因两端的粘性末端不同，从而防止反向衔接和自身环化，有效提高构成重组DNA的效率。